Котряхова Елена Николаевна.
Квалификационная работа магистра: "Изучение ультразвуковой фрагментации хроматина активных генов."
Аннотация: Вопрос о том, в какой конформации хроматина ДНК реализует свои матричные функции, остаётся открытым и широко дискутируется в современной литературе. До сих пор нет однозначной картины элонгации транскрипции, в частности, организации хроматина кодирующих областей активных генов. Несмотря на достаточно высокую степень изученности нуклеосом и комплексов с функцией преобразования (ремоделирования) нуклеосомной структуры хроматина для транскрипции, по-прежнему, остаются неясными изменения характера ДНК-гистоновых и гистон-гистоновых взаимодействий, и структуры хроматина на стадиях инициации и элонгации транскрипции. Усовершенствование условий ультразвуковой фрагментации хроматина способствовует решению задачи препаративного выделения функционально различных участков генома в виде отдельных фракций фрагментов, для дальнейшего изучения структурно-функциональных особенностей активного хроматина.
Нами был проведен подбор условий ультразвуковой обработки хроматина, а также были получены его фракции, обогащенные ДНК активных генов. Фракционирование велось различными солевыми растворами, также исследовался белковый состав данных экстрактов. Наиболее оптимальным режимом ультразвуковой обработки хроматина, для последующего его фракционирования, явилась обработка ультразвуком в течение 60 сек. и интенсивности озвучивания 0,2 кДж. Предварительно ядра инкубировали в течение двух часов в растворе изотонической сахарозы. При таких условиях хроматин сохранялся в виде крупных фрагментов(от 6000 до 20000 т.п.н.) и сохранял свои исходные специфические черты растворимости. При данном режиме выход хроматина в среду инкубации скорее всего связан с дезинтеграцией ядерного матрикса и ламины, а не с эффективностью фрагментации ДНК. Это может свидетельствовать о существовании в хроматине горячих точек ультразвуковых разрывов ДНК, которые, возможно, соответствуют сайтам нуклеазной гиперчувствительности. Во фракциях хроматина, обогащенных ДНК активных генов, гистоны представлены в неэквимолярных пропорциях. Гистоны Н3 и Н4 превалируют в различных фракциях, что, возможно, говорит о диссоциации данного димера.
Направление: Биология
Кафедра: Биохимии
Научный руководитель: Прияткина Т.Н., к.б.н.
Отзыв научного руководителя
Рецензент: к.б.н. Цветкова Е.В.
Рецензия
Дата защиты: 15-06-2015
|
