АБИТУРИЕНТУ   СТУДЕНТУ   ВЫПУСКНИКУ   СОТРУДНИКУ   РАСПИСАНИЯ


БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

ГЛАВНАЯ
НАШ ФАКУЛЬТЕТ
ПОСТУПЛЕНИЕ
ПЕРЕВОД И ВОССТАНОВЛЕНИЕ
ОБРАЗОВАНИЕ
Учебно-методическая комиссия
Бакалавриат
Магистратура
Аннотации элективных дисциплин
Аспирантура
Докторантура
Выпускникам 2017
Конкурсы и стипендии
Соц. пакет студента
Вопросы по справкам и документам
НАУКА
ЭТИЧЕСКИЙ КОМИТЕТ
ШКОЛЬНИКАМ И УЧИТЕЛЯМ
СТУДСОВЕТ
БИБЛИОТЕКА
ЭКСПЕРТНАЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ
САЧОК
БЛОГ
ТРУДОУСТРОЙСТВО
АДМИНИСТРАЦИЯ
СВЕДЕНИЯ О СПбГУ
ЗЕЛЕНЫЙ КАМПУС

Авторизация
Запомнить меня на этом компьютере
  Забыли свой пароль?
 

Главная / Образование / Магистратура

Магистерские дипломы




Донской Евгений Сергеевич

Квалификационная работа магистра: "Разработка метода определения галогенирующей активности миелопероксидазы"

Аннотация: Миелопероксидаза (MPO, К.Ф. 1.7.1.11, донор:H2O2-оксидоредуктаза) является перспективной мишенью для коррекции развития воспалительной реакции организма, ассоциированной с окислительным/галогенирующим стрессом. Описан кинетический метод определения галогенирующей активности MPO. Метод основан на измерении скорости катализируемого иодидом окисления целестинового синего (CB) хлорамином (бромамином) таурина, образующимся при реакции таурина с гипохлоритом (гипобромитом), продуцируемым MPO. Установлено, что CB не является пероксидазным субстратом MPO. Стехиометрия реакции CB с хлорамином (бромамином) таурина близка к 2:1. По данным уменьшения поглощения CB при 650 нм гипохлоритом, гипобромитом (хлор- или бромамином таурина в присутствии иодида) получен коэффициент – 15200 М-1•см-1, позволяющий рассчитать скорость их образования. Изучена зависимость активности MPO от концентрации субстратов, ингибиторов и pH среды. Охарактеризована специфичность ингибирования галогенирующей активности MPO нефрагментированной формой церулоплазмина. Метод позволяет изучать кинетические закономерности работы цикла галогенирования МРО, механизмов его ингибирования различными соединениями, а также проводить скрининг потенциальных ингибиторов МРО.

Направление: Биология

Кафедра: Биохимии

Научный руководитель: Соколов А. В. , кандидат биологических наук

Дата защиты: 18-06-2012

Отзыв о магистранте: Евгений Сергеевич Донской работает в Отделе молекулярной генетики НИИ Экспериментальной Медицины всего 2 года. За это время он освоил целый ряд биохимических методов, необходимых для решения поставленных задач. Евгений Сергеевич отличается любознательностью, трудолюбием и чрезвычайной аккуратностью. В экспериментальной работе и при обработке результатов он проявил себя самостоятельным молодым исследователем, способным успешно освоить сложные лабораторные методы и способы статистической обработки экспериментальных данных, пользоваться научной литературой. Следует отметить высокий уровень знаний, полученных Евгением Сергеевичем в Университете, который позволяет ему корректно формулировать задачи исследования и грамотно их решать. За прошедшее время Евгений ознакомился с обширной литературой по теме работы, освоил методы измерения активности миелопероксидазы (МПО), церулоплазмина (ЦП) и ряда других белков, проводил работу по иммунизации животных. Точность данных, полученных в работе по определению ферментативной активности МПО, показала аккуратность Евгения Сергеевича. За время работы он участвовал в работе по двум грантовым темам РФФИ. По результатам проведенных исследований планируется оформление патентной заявки.

Рецензент: Берлов М. Н., кандидат биологических наук

Рецензия: Миелопероксидаза (МПО) – фермент из группы оксидоредуктаз, принмающий участие в ряде физиологических и патофизиологических процессов. С одной стороны, МПО участвует в защите организма от инфекции и, возможно, от опухолевой прогрессии. С другой стороны, МПО ответственно за повреждение тканей и органов при ряде патологических состояний, таких как атеросклероз, ревматоидный артрит и др. МПО может катализировать окисление различных субстратов пероксидом водорода как по механизму одноэлектронного переноса (пероксидазная активность), так и путем двухэлектронного переноса (галогенирующая активность). В настоящее время считается, что физиологически более значимой является галогенирующая (в первую очередь, хлорирующая) активность МПО. Вместе с тем, большинство известных методов определения ферментативной активности МПО основаны на ее пероксидазной активности. Методы оценки хлорирующей активности обладают рядом недостатков, основным из которых является необходимость проводить измерение по конечной точке, т.е. отсутствует возможность наблюдать за ходом реакции в режиме реального времени. Поэтому, несомненно, задача разработки метода определения хлорирующей активности МПО, лишенного этого и других недостатков, сохраняет свою актуальность. Именно на решение этой задачи и направлена рецензируемая работа. Рецензируемая работа построена по традиционному плану, включает в себя разделы «Введение», «Обзор литературы», «Методы исследования», «Результаты исследования и их обсуждение», «Выводы», «Список литературы». Работа изложена на 71 страницах, содержит 9 рисунков и 4 таблицы. В списке литературы содержится 124 ссылки на литературные источники, включая работы самых последних лет. В разделе «Обзор литературы» излагаются основные современные сведения о структуре, каталитических свойствах и биологических функциях МПО. Рассматриваются синтетические и физиологические ингибиторы МПО. Приведена сравнительная характеристика существующих методов определения ферментативной активности МПО. Данный раздел достаточно информативен и читается с интересом. Тем не менее, к этому разделу имеется ряд замечаний. Упоминая о способности церулоплазмина (ЦП) ингибировать ферментативную активность МПО, автор не счел нужным процитировать работу, в которой этот феномен был описан впервые (Segelmark et al., 1997). В тексте можно найти ряд неудачных фраз и формулировок, например, очевидно не соответствующее действительности утверждение о пероксидазной активности гваякола. Для достижения поставленной цели автором был проделан большой объем работы. При этом трудоемкие подготовительные этапы проделанной работы (получение препаратов МПО и ЦП, скрининг красителей) описаны в тексте более чем лаконично. Основная часть раздела «Методы исследования» посвящена описанию методов определения активности МПО: представленного в работе нового метода с использованием целестинового синего (ЦС) и методов, использованных в работе для сравнения. Разработанный автором метод основан на последовательности химических реакций, лишь первые этапы которой, связанные с образованием гипогалоидных кислот, катализируются МПО. Дальнейшие реакции (галогенирование таурина, взаимодействие галогенированного таурина с иодидом, окисление ЦС) протекают неферментативно. Для того чтобы данный метод позволял корректно оценивать активность фермента, необходимо, чтобы именно образование гипохлорита (или гипобромита) было скорость-лимитирующей стадией всей последовательности реакций. Имеются ли у автора какие-либо сведения о том, соблюдается ли это условие? В работе не приведено никаких комментариев на этот счет. В качестве кинетической модели, описывающей ферментативный катализ МПО, автор использует уравнение Михаэлиса-Ментен. Следует отметить, что автор приводит основательную аргументацию в пользу возможности использования кинетики Михаэлиса-Ментен в данном случае, подчеркивая, что реакция, катализируемая МПО, удовлетворяет семи основным условиям, необходимым для применимости модели. В научной литературе, в том числе в работах, опубликованных в ведущих биохимических журналах, можно найти целый ряд примеров применения кинетики Михаэлиса-Ментен для МПО. Все это, как минимум, дает право на существование точке зрения, поддержанной автором. В качестве кинетической характеристики реакции в работе используется каталитическая константа (kcat). Для ее расчета автор использует не асимптотическую константу Vmax, а значение скорости реакции, непосредственно полученное в эксперименте с использованием концентрации субстрата, рассматриваемой как насыщающая. В связи с этим, возникает вопрос, насколько, по мнению автора, корректны такие расчеты? Полученные в ходе выполнения работы данные изложены в разделе «Результаты исследования и их обсуждение». Стоит отметить, что «Обсуждение результатов» представлено отдельным подразделом. Возможно, имело бы смысл не объединять его с результатами и выделить в качестве самостоятельного раздела. Имеется ряд замечаний по оформлению иллюстраций. Рисунок 5 разбит на две части (а и б), а рисунок 6 – на пять частей (а-е). При этом эти части расположены на разных страницах, снабжены различными заголовками и подрисуночными подписями. Остается непонятной целесообразность объединения их под одним номером. На рисунках отсутствуют номера кривых, упоминаемые в подрисуночных подписях. Кроме того, неясно, сколько экспериментов соответствует одной точке на рисунках, объединенных под номером 6. В ходе выполнения исследования автор показал, что метод с использованием ЦС обладает наибольшей чувствительностью из всех рассмотренных методов, позволяет проводить измерения в широком диапазоне значений pH, определять кинетические характеристики фермента, изучать действие на него ингибиторов. Подробно рассмотрен механизм действия на галогенирующую активность МПО ее физиологического ингибитора – ЦП. По результатам работы автор делает 4 вывода. Выводы корректны и соответствуют полученным результатам. В порядке обсуждения результатов хотелось бы узнать мнении автора по следующим вопросам: 1) Может ли в данной системе таурин быть заменен другими аминосодержащими соединениями, в частности, другими аминокислотами? Или же такие вещества в пробе будет функционировать в качестве перехватчиков гипохлорита? 2) Согласно полученным данным, ЦП является неконкурентным ингибитором галогенирующей активности МПО. Вместе с тем, в предшествующих работах научной группы ЦП был охарактеризован как конкурентный ингибитор пероксидазной активности фермента. Чем можно объяснить такие различия в механизме ингибирования? Подводя итог, можно отметить, что в ходе проделанной работы автор разработал новый метод определения галогенирующей активности МПО, обладающий очевидными преимуществами по сравнению с ранее описанными методами и представляющий несомненную практическую ценность, а также получил интересные данные фундаментального характера о механизме ингибирующего действия ЦП по отношению к МПО. Все это дает основания оценить работу Донского Е.С. на "отлично".

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2011г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2012г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2013г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2014г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2015г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2016г.


контакты       карта сайта      почтовый сервер       управление      поддержка

199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., 7-9
© Санкт-Петербургский государственный университет, 2006-2017