АБИТУРИЕНТУ   СТУДЕНТУ   ВЫПУСКНИКУ   СОТРУДНИКУ   РАСПИСАНИЯ


БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

ГЛАВНАЯ
НАШ ФАКУЛЬТЕТ
ПОСТУПЛЕНИЕ
ПЕРЕВОД И ВОССТАНОВЛЕНИЕ
ОБРАЗОВАНИЕ
Учебно-методическая комиссия
Бакалавриат
Магистратура
Аннотации элективных дисциплин
Аспирантура
Докторантура
Выпускникам 2017
Конкурсы и стипендии
Соц. пакет студента
Вопросы по справкам и документам
НАУКА
ЭТИЧЕСКИЙ КОМИТЕТ
ШКОЛЬНИКАМ И УЧИТЕЛЯМ
СТУДСОВЕТ
БИБЛИОТЕКА
ЭКСПЕРТНАЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ
САЧОК
БЛОГ
ТРУДОУСТРОЙСТВО
АДМИНИСТРАЦИЯ
СВЕДЕНИЯ О СПбГУ
ЗЕЛЕНЫЙ КАМПУС

Авторизация
Запомнить меня на этом компьютере
  Забыли свой пароль?
 

Главная / Образование / Магистратура

Магистерские дипломы




Худяков Александр Александрович

Квалификационная работа магистра: "Создание генно-инженерных конструкций, содержащих ген мутантного актина, вызывающий врождённые пороки сердца"

Аннотация: Врождённые пороки сердца (ВПС) представляют собой дефекты структуры сердца или крупных сосудов, обычно появляющиеся до рождения. С развитием патологии как правило связаны мутации в определённых группах генов. Часть этих генов кодирует транскрипционные факторы, регулирующие определённые события во время развития сердца, другая часть кодирует белки сократительного аппарата кардиомиоцитов -саркомера. Однако до сих пор механизмы патогенеза ВПС на молекулярно-клеточном уровне остаются невыясненными. Одной из причин, затрудняющей подобные исследования, является отсутствие доступной клеточной модели развития сердца человека. Отчасти решить эту проблему помогает недавнее открытие явления индукции плюрипотентности, позволяющее получать клетки, аналогичные по свойствам эмбриональным стволовым клеткам, и дифференцировать их в кардиомиоциты. Таким образом становится возможным моделирование перехода недифференцированная стволовая клетка ‒ ранний кардиомиоцит ‒ зрелый кардиомиоцит, имеющего место при эмбриональном развитие сердца. Целью данной работы было создание системы для моделирования влияния мутаций в гене сердечного актина на формирование сердца в эмбриогенезе. В ходе работы были получены генетические конструкции на основе лентивирусных векторов, содержащие кодирующую последовательность мутантного гена сердечного актина (содержащего патогенные мутации Glu101Lys и Met123Val) и гена "дикого типа". Была показана эффективная экспрессия полученных конструкций в клетках эмбриональной почки человека HEK 293T. Была налажена методика получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток из фибробластов кожи человека и проведена их дифференцировка в функционально зрелые кардиомиоциты.

Направление: Биология

Кафедра: Биохимии

Научный руководитель: Малашичева А. Б. , кандидат биологических наук

Дата защиты: 18-06-2012

Отзыв о магистранте: Александр Александрович пришёл в нашу лабораторию при поступлении в магистратуру, то есть 2 года назад. В начале работы ему пришлось осваивать многие методики, в том числе работу с клетками, выделение ДНК, РНК и многие другие, хотя не могу не отметить, что уровень его подготовки был уже тогда достаточно высок. За первый год работы мы с Сашей овладели методом выделения клеток из миокарда человека, что было связано с организационными и массой технических сложностей, а также и с тем, что направление работы, которую мы начали, было новым и для научного руководителя. Также за первый год Саша овладел методами секвенирования генов и участвовал в секвенировании актина у группы пациентов, которое проводилось в нашей лаборатории. Через некоторое время после начала работы выяснилось, что метод получения предшественников кардиомиоцитов, выбранный нами, оказался малоэффективным, и мы приступили к трудным поискам нового, более эффективного метода. Научная составляющая нашего проекта потребовала, чтобы это были индуцированные плюрипотентные клетки, а получение их, особенно человеческих – весьма затратный и трудоемкий метод, и кроме того мне было известно, что некоторые лаборатории пытались у нас в России его наладить, и потерпели неудачу. Поэтому было принято решение о налаживании связей с авторитетной лабораторией в Германии, и была организована стажировка, на которую я, не сомневаясь, отправила Сашу. Как результат, метод был освоен, и результаты получены уже в нашей лаборатории - Саше удалось получить сокращающиеся кардиомиоциты человека из фибробластов кожи, и тем самым внести неоценимый научный вклад в работу всей нашей лаборатории. В прошлом году Саша участвовал в конференции молодых учёных нашего института, его доклад был отмечен премией, и затем он был выдвинут на конкурс УМНИК, который также с успехом выиграл и получил стипендию для финансирования его исследований. Работа Саши была чисто поисковой, и рискованной с точки зрения выполнимости, но его не испугали все эти трудности, и он активно работал на протяжении всего обучения в магистратуре. За время обучения Саша много и охотно помогал коллегам по лаборатории в овладении самыми разнообразными методиками, а также младшим коллегам, чем оказал мне неоценимую помощь. Так сложились обстоятельства, что прошедший год Саше пришлось много работать самостоятельно, с чем он с успехом справился и очень вырос профессионально. Саша - трудолюбивый и увлечённый студент, он обдумывает полученные результаты, учится и делает выводы, читает много научной литературы и использует для этого все предоставленные возможности, что не может не радовать научного руководителя. Мне очень приятно общаться с ним по нашему научному проекту, потому что я всегда вижу в Саше отклик, и за время работы проект, выполняемый Сашей под моим руководством, действительно стал нашим общим делом, которое, как я надеюсь, будет продолжено при обучении Саши в аспирантуре.

Рецензент: Горюхина О. А., кандидат биологических наук

Рецензия: Генетические исследования пациентов с врождёнными пороками сердца выявили ряд генов, мутации в которых ассоциированы с развитием заболевания. Однако механизмы патогенеза заболевания на молекулярном и клеточном уровнях остаются невыяснены. Для проведения подобных исследований необходимо иметь доступную клеточную модель развития сердца человека. Создание системы для моделирования влияния мутаций в гене сердечного актина на формирование сердца в эмбриогенезе явилось целью настоящей работы. В результате проведённых исследований автором был получен лентивирусный вектор, содержащий кодирующую последовательность гена сердечного актина дикого типа и ген актина, несущий патогенные мутации . Наряду с этим были получены лентивирусные частицы, несущие репрограмирующий набор кДНК генов Oct 3/4, Klf4, Sox2, cMyc, который был впервые разработан японским исследователем Takahashi в 2007 году. Использование этого вектора позволило получить индуцированные плюрипотентные стволовые клетки из культуры фибробластов кожи человека при их трансдукции лентивирусными частицами. Полученные индуцированные плюрипотентные стволовые клетки человека были подобны эмбриональным стволовым клеткам по морфологии, паттерну экспрессии генов, эпигенетическому статусу и способности к дифференцировке in vitro. Магистерская диссертация состоит из из введения (1 страница), обзора литературы (19 страниц, 4 рисунка, 2 таблицы), раздела материалы и методы (19 страниц, 4 рисунка), результаты (12 страниц, 11 рисунков), обсуждение результатов (2 страницы), выводы и списка литературы (91 источник). Вступление полностью раскрывает состояние вопроса в целом и цели работы четко обоснованы. Для решения поставленных задач были использованы адекватные молекулярно-генетические и клеточные методы. Такой подход позволил получить оригинальные результаты. Обсуждение полученных результатов проведено с привлечение современных литературных данных, касающихся существа вопроса. В обзоре представлены такие взаимосвязанные разделы как врождённые пороки сердца, механизмы развития врождённых пороков сердца, сердечный актин, получение культуры кардиомиоцитов, открытие индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, получение кардиомиоцитов из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток. Обзор написан хорошим литературным языком, содержит современные данные литературы, легко и с интересом читается. Следует отметить, что во всём тексте диссертации практически отсутствуют неудачные формулировки. Все используемые аббревиатуры представлены в списке сокращений. Материалы и методы написаны подробно, но в ряде случаев, при описании получения конечного продукта (раствора или осадка) не указывается его состав, что затрудняет восприятие материала. Например:  на стр. 33 в разделе 2.2.1.4, первый абзац, вторая строка снизу, написано: "осадок высушивали под тягой", следует читать: "осадок, содержащий плазмидную ДНК вектора pLVTHM-ACTC1 высушивали под тягой";  на стр. 33 в разделе 2.2.1.4, первый абзац, написано: "супернатант отфильтровывали", следует читать: "супернатант, содержащий лентивирусные частицы отфильтровывали"; В тексте присутствуют опечатки, например:  на стр. 21, первая строка снизу, написано: "с данными Moretti с соавторами.", следует читать "с данными Moretti с соавторами (Moretti et al., 2010).";  на стр. 32 в разделе 2.2.1.3, третья строка сверху, написано: "вектор pLVTHM", следует читать "вектор pLVTHM-EGFP";  на стр. 34 в разделе 2.2.2.1 в предложении "праймеры для сайт-специфического мутагенеза подбирали вручную", следует объяснить понятие "вручную";  на стр. 43 в разделе 3.1.2 написано: "встроен в плазмиду pLVTHM-T7-EGFP", следует читать: "встроен в плазмиду pLVTHM-T7-EGFP вместо T7-EGFP".  на стр. 53, четвертая строка снизу, написано: "в лаборатории G. Keller", следует указать название лаборатории и страну. Вопрос для обсуждения: На стр. 32 в разделе 2.2.1.3 и на стр.43 в разделе 3.1.2 описано проведение реакции лигирования по липким концам кДНК гена сердечного актина и лентивирусного вектора pLVTHM в присутствии ДНК-лигазы фага Т4. Автор называет полученный продукт "неочищенная лигазная смесь". Корректна ли такая формулировка? Возможна ли альтернативная формулировка: "неочищенная лигазная смесь рекомбинантных молекул ДНК"? А. А. Худяковым был проделан большой объём экспериментальной работы. Каждый этап работы подвергался тщательному анализу. Следует отметить, что для оценки полученного конечного продукта (векторов, индуцированных плюрипотентных стволовых клеток и др.) использовали ряд экспериментальных подходов. В целом работа выполнена на высоком уровне. Александр Александрович Худяков освоил ряд молекулярно-биологических и культуральных методов, необходимых для дальнейшей работы. Магистерская диссертация Александра Александровича Худякова заслуживает оценки "отлично".

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2011г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2012г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2013г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2014г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2015г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2016г.


контакты       карта сайта      почтовый сервер       управление      поддержка

199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., 7-9
© Санкт-Петербургский государственный университет, 2006-2017