АБИТУРИЕНТУ   СТУДЕНТУ   ВЫПУСКНИКУ   СОТРУДНИКУ   РАСПИСАНИЯ


БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

ГЛАВНАЯ
НАШ ФАКУЛЬТЕТ
ПОСТУПЛЕНИЕ
ПЕРЕВОД И ВОССТАНОВЛЕНИЕ
ОБРАЗОВАНИЕ
Учебно-методическая комиссия
Бакалавриат
Магистратура
Аннотации элективных дисциплин
Аспирантура
Докторантура
Выпускникам 2017
Конкурсы и стипендии
Соц. пакет студента
Вопросы по справкам и документам
НАУКА
ЭТИЧЕСКИЙ КОМИТЕТ
ШКОЛЬНИКАМ И УЧИТЕЛЯМ
СТУДСОВЕТ
БИБЛИОТЕКА
ЭКСПЕРТНАЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ
САЧОК
БЛОГ
ТРУДОУСТРОЙСТВО
АДМИНИСТРАЦИЯ
СВЕДЕНИЯ О СПбГУ
ЗЕЛЕНЫЙ КАМПУС

Авторизация
Запомнить меня на этом компьютере
  Забыли свой пароль?
 

Главная / Образование / Магистратура

Магистерские дипломы




Логинова Ирина Николаевна

Квалификационная работа магистра: "Клонирование гена М белка стрептококков группы А и его экспрессия в гетерологической системе E.coli"

Аннотация: Одним из наиболее распространенных возбудителей бактериальных инфекций человека является Streptococcus pyogenes (или β -гемолитический стрептококк группы А, СГА). Сегодня в значительном проценте случаев он отвечает за поражение верхних дыхательных путей (скарлатина, острый фарингит), кожных покровов (рожа, импетиго) и развитие постстрептококковых аутоиммунных и токсико-септических осложнений. Антибиотики, широко применяемые для лечения и профилактики стрептококковых инфекций, часто оказываются неэффективными в силу увеличения числа антибиотикоустойчивых штаммов. Другим недостатком антибиотикотерапии является возникновение побочных эффектов из-за нарушения состава микробиоты человека. В этой связи актуален поиск новых средств и способов профилактики, в том числе специфической профилактики инфекций, вызываемых СГА, посредством создания вакцинных препаратов. Среди поверхностных белковых факторов патогенности СГА перспективным кандидатом для создания вакцины рассматривается М-белок – главный фактор вирулентности СГА, обеспечивающий защиту бактерий от фагоцитоза. Известно, что М-белок иммуногенен, антитела против него протективны, однако высокая степень антигенной вариабильности и наличие в структуре аминокислотных участков, сходных с тканями миокарда, могут приводить к тяжелым иммунопатологическим последствиям, а в частности к ревмокардиту. Все вышеуказанное подчеркивает необходимость создания вакцины на основе М-белка без перекрестных эпитопов и с включением наиболее распространенных антигенных доменов. В силу изложенного, объектом исследования данной работы стал штамм Streptococcus pyogenes серотипа М39 из коллекции патогенных стрептококков отдела молекулярной микробиологии ФГБУ «НИИЭМ» СЗО РАМН. Целью исследования стало получение рекомбинантного полипептида на основе участка гена, кодирующего М белок штамма S. pyogenes серотипа М39 для дальнейшего изучения его иммуногенных и протективных свойств в опытах in vitro и in vivo. Впервые было проведено секвенирование гена кодирующего М белок (emm39) штамма S. pyogenes, относящегося к серотипу М39. Компьютерный анализ участка гена emm39 исследуемого штамма, показал наличие в нем распространенных функциональных мотивов, таких как структура «лейциновая молния» и сайт амидирования. Кроме того, компьютерный анализ выявил высокую гомологию гена emm39 с консервативными фрагментами emm генов штаммов S. pyogenes других серотипов и его вариабельность в N-концевой части. С помощью ПЦР была произведена амплификация необходимого участка ДНК, кодирующего М-белок, и осуществлено клонирование данной последовательности в экспрессионный вектор pQE-30 в системе E. coli. Клоны кишечной палочки проанализированы посредством выделения плазмид и постановки ПЦР с праймерами, гомологичными вставке участка гена emm39 S. pyogenes М39. Проверку клонов-трасформантов на способность экспрессировать рекомбинантный полипептид Emm39 осуществляли с помощью аффинной хроматографии на Ni-сефарозе. Выделенный и очищенный рекомбинантный полипептид Emm39 с молекулярной массой 31 кДа рекомендован к использованию в исследованиях по анализу перспективности данного пептида в качестве компонента вакцинного препарата против СГА. Другим применением рекомбинантного полипептида Еmm39 является получение высокоспецифических иммуноглобулинов против М белка S. pyogenes М39, что позволит анализировать уровень экспрессии данного белка в штаммах этого серотипа, а также осуществлять мониторинг белка в органах и системах инфицированных данным штаммом лабораторных животных.

Направление: Биология

Кафедра: Цитологии и Гистологии

Научный руководитель: д. м. н. Суворов А. Н.

Дата защиты: 18-06-2013

Отзыв о магистранте:

Текст (.pdf)

Рецензент: Кокряков В.Н. , доктор биологических наук

Рецензия: Магистерская диссертация Логиновой И.Н. посвящена поиску новых способов профилактики инфекций, вызываемых стрептококками группы А, основанных на создании пептидных вакцинных препаратов, Патогенные стрептококки вызывают широкий круг заболеваний (фарингиты, тонзиллиты, скарлатину, кожные заболевания), а также являются одним из патогенетических факторов осложнения гломерулонефритов, ревмокардитов, некротических фасцитов. Особенностью этой группы инфекционных агентов является их чрезвычайная генетическая изменчивость и пластичность, обеспечивающие быстрое формирование у них антибиотикорезистентности. Поэтому работы по созданию вакцин нового типа для профилактики и терапии стрептококковой инфекции являются в настоящее время магистральными в рассматриваемом разделе биомедицинских исследований. Одним из новых направлений при создании вакцин является использование в качестве их ведущих компонентов рекомбинантных полипептидов, имитирующих антигенные детерминанты белковых факторов патогенности стрептококков группы А, В связи с этим цель исследования, заключающаяся в получении рекомбинантного фрагмента М белка штамма Streptococcus pyogenes серотипа М39 для дальнейшего изучения его иммуногенных и протективных свойств в опытах in vivo и in vitro, является несомненно актуальной. Совокупность молекулярно-генетических и биотехнологических методов исследования в сочетании с компьютерным анализом участка гена М белка позволила соискателю впервые просеквенировать фрагмент emm гена S. pyogenes серота М39 и детектировать в нем нуклеотидные последовательности, ответственные за синтез таких распространенных функциональных мотивов, как «лейциновая молния" и сайт зондирования. Осуществлено клонирование фрагмента етт гена в системе Е.со1i и на основании этого создан штамм-продуцент рекомбинантного полипептида Еmm39, который был выделен, очищен и охарактеризован по физико-химическим параметрам. Все это свидетельствует о том, что в ходе выполнения работы Логиновой И.Н. профессионально реализована задача получения рекомбинантного полипептида, который в дальнейшем планируется использовать в качестве ведущего компонента полипептидной антистрептококковой вакцины. Рецензируемая работа построена по традиционному плану, включает в себя разделы «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы исследований», «Результаты исследований и их обсуждение», «Выводы», «Список использованной литературы», Работа изложена на 54 страницах, иллюстрирована 11 рисунками и 2 таблицами. Список литературы содержит 77 ссылок на литературные источники, из них 12 отечественных. Магистерская диссертация написана и оформлена в соответствии с предъявляемыми требованиями. Во «Введении» работы обоснована актуальность цели и экспериментальных задач исследования, «Обзор литературы» представляет собой современное изложение сведений о факторах патогенности стрептококков и подходах в создании противострептококковых вакцин. Раздел «Материалы и методы исследований» содержит протоколы выделения хромосомной и плазмидной ДНК, электрофореза ДНК и ее извлечение из агарозного геля, описание методов клонирования фрагментов ДНК, трансформации культуры Е. соli плазмидной ДНК, выделения и очистки рекомбинантного полипептида. Описание применяемых в работе молекулярно- микробиологических, биотехнологических и биохимических методов осуществлено корректно. Совокупность используемых методов позволила соискателю эффективно решить поставленные в работе задачи, По результатам работы автор делает 4 вывода. Выводы работы корректны и логически вытекают из полученных результатов. В ходе ознакомления с работой не возникло принципиальных замечаний, однако необходимо заметить, что на стр. 20 С5а компонент комплемента отнесен к важнейшим опсонинам, тогда как на самом деле он является одним из ведущих эндогенных хемокинов. На стр. 22 нельзя считать удачным словосочетание «из бактериальных и вирусных тканей». Нельзя считать удачной на стр. 35 подпись к рис. 2 «Анализ аминокислотной последовательности фрагмента гена еmm39», Однако, эти замечания не является принципиальными и не снижают общего положительного впечатления от работы. Таким образом, магистерская диссертация Логиновой И.Н. является профессионально выполненной и оформленной квалификационной работой, посвященной разработке молекулярно-генетических и биотехнологических подходов клонирования фрагмента гена М белка стрептококков группы А и его экспрессии в метеорологической системе Е. coli. и, несомненно, заслуживает оценки "отлично",

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2011г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2012г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2013г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2014г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2015г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2016г.


контакты       карта сайта      почтовый сервер       управление      поддержка

199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., 7-9
© Санкт-Петербургский государственный университет, 2006-2017