АБИТУРИЕНТУ   СТУДЕНТУ   ВЫПУСКНИКУ   СОТРУДНИКУ   РАСПИСАНИЯ


БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

ГЛАВНАЯ
НАШ ФАКУЛЬТЕТ
ПОСТУПЛЕНИЕ
ПЕРЕВОД И ВОССТАНОВЛЕНИЕ
ОБРАЗОВАНИЕ
Учебно-методическая комиссия
Бакалавриат
Магистратура
Аннотации элективных дисциплин
Аспирантура
Докторантура
Выпускникам
Конкурсы и стипендии
Соц. пакет студента
Вопросы по справкам и документам
НАУКА
ЭТИЧЕСКИЙ КОМИТЕТ
ШКОЛЬНИКАМ И УЧИТЕЛЯМ
СТУДСОВЕТ
БИБЛИОТЕКА
ЭКСПЕРТНАЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ
САЧОК
БЛОГ
ТРУДОУСТРОЙСТВО
АДМИНИСТРАЦИЯ
СВЕДЕНИЯ О СПбГУ
ЗЕЛЕНЫЙ КАМПУС

Авторизация
Запомнить меня на этом компьютере
  Забыли свой пароль?
 

Главная / Образование / Магистратура

Магистерские дипломы




Сазонова Евгения Алексеевна

Квалификационная работа магистра: "Создание штамма дрожжей Pichia pastoris c дизрупцией гена YPS1, кодирующего GPI-заякоренную аспарагиновую протеазу"

Аннотация: Многочисленные исследования подтверждают успешное использование дрожжей P. pastoris в качестве системы экспрессии гетерологичных белков. Метилотрофные дрожжи P. pastoris сочетают в себе преимущества микроорганизмов (простые среды для культивирования, отработанные методики культивирования, способность к быстрому росту и накоплению большой биомассы), а также способность осуществлять ряд посттрансляционных изменений, характерных для высших эукариот. Преимущества системы экспрессии на основе дрожжей Р. pastoris позволяет использовать ее для продукции различных эукариотических рекомбинантных белков. Однако недавние исследования свидетельствуют о том, что гетерологичные белки, секретируемые в культуральную среду, подвергаются протеолитической деградации. Исследование продуктов протеолиза, влияния различных ингибиторов, физических параметров на характер протекания реакции, позволило заключить, что протеазы культуральной среды относятся к аспарагиновым протеазам семейства япсина (Yps1p). В связи с этим возникла необходимость разработки методов, позволяющих снизить уровень протеолиза: введение дополнительных субстратов для протеаз (казаминовые кислоты, пептон), использование ингибиторов протеаз, создание штаммов, мутантных по гену, кодирующему протеазу. Наиболее эффективным способом снижения протеолитической активности Yps1p является создание штаммов дрожжей с инактивированным геном YPS1. В результате проделанной работы получен вектор экспрессии рSP73YPS1::ZEO, который был использован для трансформации штамма дрожжей Р. pastoris (GS115). На основе полученного штамма был создан штамм-продуцент сшитого с альбумином лекарственного белка (Альбумин-ИНФ-альфа16) с последующей оценкой протеолитического расщепления секретируемого ими рекомбинантного белков по сравнению со штаммом, дикого типа.

Направление: Биология

Кафедра: Цитологии и Гистологии

Научный руководитель: Карабельский А. В. , кандидат биологических наук

Дата защиты: 15-11-2011

Отзыв о магистранте: Е.А. Сазонова в 2005 году поступила на дневное отделение биолого-почвенного факультета СПБГУ. Интерес к проблемам регуляции матричных процессов и метаболизма клетки определил выбор кафедры цитологии и гистологии для будущей специализации. С 2007 года Евгения Сазонова выполняет свое исследование в лаборатории биохимической генетики. Она проявила большой интерес к предложенной теме исследования и освоила современные методы выделения и анализа плазмидной и хромосомной ДНК, ПЦР, методы трансформации бактерий и дрожжей, культивирование штаммов дрожжей-продуцентов рекомбинантных белков человека, методы выделения и анализа рекомбинантных белков. Хорошая методическая подготовка позволила ей решить поставленную задачу: создание штамма дрожжей Pichia pastoris с дизрупцией гена YPS1 и выяснение влияния инактивации гена YPS1 на жизнеспособность метилотрофных дрожжей Pichia pastoris. В ходе выполнения работы Евгения продемонстрировала способность самостоятельно обрабатывать полученные результаты, делать выводы и планировать дальнейшую экспериментальную работу. Хорошее знание английского языка позволяет ей свободно ориентироваться в литературе и поддерживать свои знания на современном уровне. Е.А. Сазонову отличают трудолюбие, упорство, ответственность, заинтересованность в достижении поставленной цели, стремление к доскональному изучению литературных данных по научной проблеме, собранность и аккуратность, что, несомненно, помогает ей в научной деятельности. Е.А. Сазонова может быть рекомендована для поступления в аспирантуру.

Рецензент: Рубель А. А., кандидат биологических наук

Рецензия: Магистерская диссертационная работа Сазоновой Евгении Алексеевны посвящена получению штамма дрожжей Pichia pastoris, несущего дизрупцию гена YPS1, кодирующего аспарагиновую протеазу. Работа написана по стандартному плану и включает следующие разделы: «Список сокращений», «Введение», «Обзор литературы», «Цели и задачи», «Материалы и методы», «Результаты», «Обсуждение», «Выводы», «Список литературы» и «Приложение». Работа выполнена на 75 страницах, содержит 1 таблицу и иллюстрирована 27 рисунками, из которых 3 вынесены в «Приложение». Раздел «Обзор литературы» изложен на 23 страницах. Раздел логично написан, хорошо сочетается с заявленной темой исследования, хотя в некоторых местах, на взгляд рецензента, излишне перегружен деталями. К разделу имеется несколько замечаний. На стр. 15 автор пишет: «Ортологи белка Sc Yps1p обнаружены у 16 видов грибов, принадлежащим к группе аскомицетов. В каждом виде представлено от 1 до 3 япсинов.». В тоже самое время, в табл. 1 у дрожжей S. cerevisiae представлено 5, а у Candida glabrata 7 япсинов. Кроме того, есть замечания к табл. 1, название табл. «Структурные домены представителей семейства япсинов», в тоже время в таблице присутствует информация только о петлевом домене. Непонятно, что обозначает N в заголовке одного из столбцов, и какого рода данные в нем содержаться. Большая часть подписей к рисунку 1 находится, на следующей за ним станице, кроме того в подписях к рисунку отсутствует обозначение структур белка Sc Yps1, выделенных желтым оранжевым и красным цветом. Правда стоит отметить, что эти структуры обозначены на рисунке 2. Что означает фраза на стр. 19 «Шеддинг с поверхности мембраны»? По мнению рецензента в магистерской диссертационной работе не следовало подробно описывать стандартные методы: трансформация бактерий, выделение хромосомной ДНК из дрожжей и т.д., достаточно было привести ссылки. Не стоило писать полные протоколы всех микробиологических сред, так как среды, например, LB не являются уникальными. Излишне было делить раздел методы на 11 подразделов, стоило их объединить под названием молекулярно-биологические методы. Рецензенту остался непонятен принцип разделения методов на подразделы, так, например, вслед за подразделом 3.2 «Методы» идёт подраздел 3.3 «Определение концентрации белков». К замечаниям стоит отнести отсутствие ссылок на источник плазмид pSP73 и pPICZalfaB Экспериментальная часть работы представлена разделом «Результаты». Полученные Сазоновой Е.А. результаты подробно описаны. Утверждения, которые делает автор, подкреплены и согласуются с фактическим материалом, представленным в виде рисунков. Замечания к разделу. Информацию о последовательности праймеров, а также о наборе реактивов для выделения ДНК стоило поместить в раздел материалы и методы. На взгляд рецензента, излишне было проводить анализ сконструированных в работе плазмид с помощью ПЦР, можно было ограничиться рестрикционным анализом. На стр. 51 представлена не таблица, а рисунок. По данным теста на разведение, представленных на рис., нельзя сделать однозначный вывод о влиянии 50мМ NaCI на жизнеспособность клеток. В скольких повторностях ставили тест на разведение? Выводы работы соответствуют поставленным задачам. Список литературы состоит из 68 работ, 62 из которых на английском языке. Представленный в работе список литературы наводит на мысль о хорошей теоретической осведомлённости Евгении Алексеевны о протеазах дрожжей. Хочется отметить, что список составлен единообразно, и практически не содержит недочётов. Несмотря на вышеуказанные замечания, работа Сазоновой Евгении Алексеевны, безусловно, заслуживает внимания, она выполнена на хорошем методическом уровне с получением интересных, грамотно оформленных результатов, и заслуживает оценку «отлично».

Оценка: 5

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2011г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2012г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2013г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2014г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2015г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2016г.


контакты       карта сайта      почтовый сервер       управление      поддержка

199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., 7-9
© Санкт-Петербургский государственный университет, 2006-2017