АБИТУРИЕНТУ   СТУДЕНТУ   ВЫПУСКНИКУ   СОТРУДНИКУ   РАСПИСАНИЯ


БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

ГЛАВНАЯ
НАШ ФАКУЛЬТЕТ
ПОСТУПЛЕНИЕ
ПЕРЕВОД И ВОССТАНОВЛЕНИЕ
ОБРАЗОВАНИЕ
Учебно-методическая комиссия
Бакалавриат
Магистратура
Аннотации элективных дисциплин
Аспирантура
Докторантура
Выпускникам
Конкурсы и стипендии
Соц. пакет студента
Вопросы по справкам и документам
НАУКА
ЭТИЧЕСКИЙ КОМИТЕТ
ШКОЛЬНИКАМ И УЧИТЕЛЯМ
СТУДСОВЕТ
БИБЛИОТЕКА
ЭКСПЕРТНАЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ
САЧОК
БЛОГ
ТРУДОУСТРОЙСТВО
АДМИНИСТРАЦИЯ
СВЕДЕНИЯ О СПбГУ
ЗЕЛЕНЫЙ КАМПУС

Авторизация
Запомнить меня на этом компьютере
  Забыли свой пароль?
 

Главная / Образование / Магистратура

Магистерские дипломы




Евкайкина Анастасия Игоревна

Квалификационная работа магистра: "Клеточные и молекулярные аспекты организации апикальной меристемы Selaginella kraussiana (Kuntze) A.Braun и Huperzia selago (L.) Bernh. ex Schrank et Mart. (Lycopodiophyta)"

Аннотация: Сравнительное изучение апикальных меристем S.kraussiana и H.selago методом световой микроскопии позволило выявить у изученных видов плаунообразных различия в числе апикальных инициалей, особенностях формирования зональной структуры, числе зон и характере делений клеток зоны поверхностных инициалей. Выявлено, что различия в зональности изученных видов определяются разным числом периклинальных делений поверхностных инициалей. Установлена главная роль поверхностных инициалей в образовании листьев у обоих видов. Показано, что апикальные меристемы изученных видов различаются по симпластической организации: в клеточных стенках S.kraussiana обнаруживаются неветвящиеся плазмодесмы с высокой плотностью, а у H.selago - ветвящиеся плазмодесмы с крайне низкой плотностью. Сделано предположение о первичной (цитокинетической) природе плазмодесм S.kraussiana и их вторичной (пост-цитокинетической) природе у H.selago. Амплифицирован полный клон кДНК гена-гомолога KNOTTED1 S. kraussiana SkKNOX1, на основе которого получены векторы для in vitro транскрипции и для in vitro трансляции с целью получения рекомбинантного белка SkKNOX1. Методом in vitro транскрипции получены содержащие меченый дигоксигенином уридинмонофосфат рибонуклеотидные зонды для выявления локализации транскриптов SkKNOX1 в апикальной меристеме S.kraussiana методом РНК-РНК гибридизации in situ. Методом иммуноблоттинга выявлено специфичное кросс-реагирование антител, полученных к белкам KNOTTED1 кукурузы, с белками-гомологами KNOX S.kraussiana и H.selago. Разработан метод подготовки полутонких (4 мкм) срезов апикальных меристем S.kraussiana и H.selago, обеспечивающий высокую сохранность клеточной структуры (включая клетки апикальных инициалей), а также сохранность РНК и белков (включая антигенные детерминанты), в процессе удаления из срезов заливочной среды и их обработки сериями спиртовых и водных растворов при проведении РНК-РНК гибридизации in situ и иммуногистохимического анализа.

Направление: Биология

Кафедра: Ботаники

Научный руководитель: Войцеховская О. В. , кандидат биологических наук

Дата защиты: 06-12-2011

Отзыв о магистранте: Анастасия Игоревна Евкайкина начала работать в лаборатории экологической физиологии Учреждения Российской академии наук Ботанического института им. В. Л. Комарова РАН (БИН РАН) в 2009 году, еще до начала работы над магистерской диссертацией. На базе этой лаборатории Анастасия Игоревна проходила летнюю практику, во время которой началось ее знакомство с методами молекулярной и клеточной биологии, которые были применены в ее дальнейшей работе. К началу работы над магистерской диссертацией Анастасия Игоревна подошла, уже имея сформировавшийся интерес к вопросам эволюционной морфологии растений и механизмам морфогенеза. Этот интерес, а также эрудиция в области данной проблематики, возникли у Анастасии Игоревны благодаря выполнению ею ВКР бакалавра на каф. ботаники СПбГУ под руководством доцента кафедры, к.б.н. М.А. Романовой. Анастасия Игоревна проявила инициативу и самостоятельность при формулировке темы и выборе объектов для своей магистерской диссертации, и продолжила исследования апикальной меристемы побегов несеменных растений, начатые в ходе выполнения ВКР бакалавра, с использованием базовых методов молекулярной и клеточной биологии растений. В процессе работы над магистерской диссертацией Анастасия Игоревна ознакомилась с широким спектром современных молекулярно-биологических методов, применяемых в биологии растений, в том числе и такими сложными методиками, как локализация белков in situ с помощью иммунофлуоресценции и локализация транскриптов генов интереса методом гибридизации РНК in situ. Кроме того, Анастасия Игоревна применяла в своей работе методы световой и трансмиссионной электронной микроскопии. В процессе выполнения работы она проявила себя как увлеченный, добросовестный и организованный исследователь, продемонстрировала инициативность, настойчивость и стремление овладеть современными методами исследования. Она обладает широкой общебиологической и ботанической эрудицией, успешно освоила достаточный объем литературы по клеточным и молекулярным аспектам апикального морфогенеза. Также хотелось бы отметить, что Анастасия Игоревна являлась одним из участников проекта по изучению функциональных особенностей плазмодесм несеменных растений, поддержанного программой Президиума РАН «Биоразнообразие». В заключение хочу сказать, что запланированная работа выполнена в намеченном объеме, а Анастасия Игоревна Евкайкина после успешного окончания СПбГУ сможет продолжить занятия биологией растений в интересующей ее области в качестве аспиранта БИН РАН.

Рецензент: Котеева Н. К,, кандидат биологических наук

Рецензия: Диссертационная работа А.И.Евкайкиной посвящена изысканиям в области одной из ключевых проблем биологии развития растений – поддержание структурной целостности и морфогенетической функции апикальных меристем и механизмы их регуляции. Объектом интереса диссертанта выступают плаунообразные растения, происхождение апикальной меристемы побега (АМП) которых считается независимым в эволюционном плане от АМП семенных растений и папоротников (Kenrick and Crane, 1997; Friedman et al., 2004), которые имеют специфичные черты структурной организации АМП со сходной функциональной нагрузкой. Таким образом, в конечном итоге, сравнительная характеристика клеточных и молекулярно-генетических основ органогенеза семенных и несеменных растений - уникальная возможность для понимания эволюционного сценария становления разнообразия онтогенетических программ наземных растений. Диссертационная работа А.И.Евкайкиной является исследовательской. В ней содержатся как результаты экспериментальных изысканий в области биологии развития и клеточной биологии несеменных растений, так и результаты разработки методических подходов для дальнейших молекулярно-генетических исследований. Отличительная черта работы – качественное и логичное построение плана экспериментальных работ для достижения поставленной цели: от подробного анализа клеточных основ организации апикальных меристем и морфогенеза листьев к пониманию молекулярных механизмов их регуляции. Особую ценность работе придает обдуманный выбор модельных объектов исследования, характеризующихся контрастным строением апикальной меристемы; сравнительный подход к их изучению позволит выявить функциональные гомологии между структурами и оценить способы их трансформаций в онтогенезе. Представленная к защите работа состоит из Введения и 5 глав: «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты и обсуждение», «Основные результаты и выводы» и «Список цитируемой литературы». Во Введении дается убедительное обоснование актуальности проблемы и поставленных перед диссертантом задач. На мой взгляд, цели исследования были сформулированы несколько неудачно, сужая важность выбранного направления исследований и принижая ценность полученных результатов. Например, в качестве цели заявленного в названии исследования могло быть поставлено выявление/изучение функциональной гомологии организации апикальной меристемы у двух видов плаунообразных, характеризующихся разным типом строения апикальной меристемы. Сравнительная характеристика клеточного и симпластического строения апикальной меристемы S. kraussiana и H. selago и разработка подходов к выяснению молекулярных механизмов их функционирования могли бы быть вынесены как задачи исследования. Обзор литературы построен диссертантом грамотно, анализ имеющихся по каждому разделу данных изложен лаконично и доступно. Подробно рассмотрены существующие на настоящий момент модели организации меристем высших растений, основанные как на структурных, так и на молекулярно-генетических данных. Подчеркивается роль внутри- и межклеточных путей транспорта регуляторных сигналов в интеграции клеток апикальных меристем и морфогенезе. Из приведенных источников становится ясно, что за последние годы молекулярно-генетические и геномные исследования существенно продвинули знания о генетике поддержания организации апикальных меристем и контроле дифференциации органов у высших растений. Однако имеется значительный пробел в изучении на молекулярном уровне несеменных растений, для меристем которых не существует единого мнения о молекулярных и клеточных механизмах, задействованных в инициации листьев. Таким образом, задачи исследования, поставленные перед диссертантом, продиктованы необходимостью комплексной аналитической характеристики органогенеза разных представителей несеменных растений. Выбор уровня экспрессии регуляторного гена KNOX1 в качестве функционального маркера состояния клеток меристемы был обоснован тем, что их гомологи охарактеризованы как у семенных, так и несеменных растений. В главе Материалы и методы отсутствует раздел, посвященный цитологическим исследованиям. Однако представленные результаты доказывают блестящее владение техниками микроскопии на световом и электронном уровне, которые требуют от исследователя высокого мастерства, терпения и внимательности к деталям. Особое внимание обращает на себя методическая часть работы, посвященная подбору и модификации методик по изучению пространственных и временных аспектов экспрессии транскрипционного фактора KNOX. Следует отметить, что молекулярно-генетические исследования новых объектов не только трудоемки, но и требуют значительных временных затрат на выверку и подбор условий для каждого этапа. Успех эксперимента может зависеть от любой мелочи, включая выбор фирмы-производителя реагентов или температуру отжига праймера. Диссертантом проделана огромная работа по освоению молекулярных методик, а ткже по подбору и модификациям условий экспериментов; последнее демонстрирует понимание сущности процесса, начиная от выделения РНК или белков, составления зондов для гибридизации мРНК или in situ локализации. Автор показала владение специфическим программным обеспечением (в частности, для работы с уже известными секвенированными последовательностями KNOX, или при составлении праймеров для H. selago, для которой последовательности гомологов KNOTTED1 неизвестны) и приложила максимум усилий, чтобы сделать изложение результатов наглядным. Автору полностью удалось решить поставленные перед ним задачи. Детальное изучение клеточной структуры апикальной меристемы побега S. kraussiana и H. selago выявило существенные различия по числу зон, способу формирования зональности и симпластической организации, несмотря на то, что у обоих видов АМП многоклеточна. Значительную разницу в симпластической структуре S. kraussiana с единственной апикальной клеткой и H. selago с множественными апикальными инициалями автор склонен рассматривать в качестве аргумента в пользу первичности (цитокинетической) природы плазмодесм несеменных растений с моноплексной апикальной меристемой, а также подтверждает мнение о прямой связи между плотностью межклеточных контактов и поддержании числа апикальных инициалей в меристеме. Изучение структурных основ заложения листа показало, что органогенез у обоих изученных видов начинается с обособления группы поверхностных инициалей, однако у S. kraussiana – за счет неоднократных антиклинальных делений, а у H. selago – за счет скоординированных периклинальных делений. Выявленные автором различия в составе АМП и инициации листа полностью подтверждают необходимость молекулярных данных для прояснения вопросов, является ли многоклеточность АМП изученных видов функциональной, а также связана ли структурная специфика организации АМП и заложения листа с молекулярными особенностями. Предложенный подход, заключающийся в локализации экспрессии KNOX на уровне локализации белков и мРНК, несомненно, поможет решить эти вопросы. Судя по представленным результатам, автор добился впечатляющих результатов в подборе подходящих методов и модификации условий для in situ гибридизации мРНК и иммунолокализации белка. Можно считать успешными подбор протокола фиксации и щадящей методики заключения в смолу, при этом доказана высокая сохранность РНК при фиксации и в процессе in situ гибридизации. Автором получены рибонуклеотидные зонды для работы с транскриптами SkKNOX1 в апикальной меристеме Selaginella kraussiana. Отсутствие сигнала после проведения in situ РНК-РНК гибридизации автор объясняет субптимальной концентрацией РНК в зондах; этот вывод представляется вполне обоснованным, что выявляет дальнейшие пути для продолжения работы. Попытка амплификации фрагмента гена-гомолога KNOTTED1 из меристемы Huperzia selago, для которой нуклеотидные иили белковые последовательности гомологов KNOTTED1 неизвестны, показала, что, возможно, нуклеотидные последовательности гомологов KNOTTED1 H. selago значительно отличаются от таковых у других растений. Такое предположение достаточно интересно, чтобы попытаться в дальнейшем его доказать. Отсутствие иммунометки при иммуногистолокализации белков-гомологов KNOX в апикальных меристемах S. kraussiana и H. selago, можно объяснить только неоптимизированным протоколом, на это указывает доказанная автором иммунореактивность антител; прогнозы по дальнейшей работе в этом направлении достаточно благоприятны, особенно если перенести эти исследования на электронно-микроскопический, более чувствительный, метод, который позволит выявить не только тканевую, но и внутриклеточную локализацию белка. В целом, надо отметить качественное обсуждение результатов исследования с учетом всех полученных анатомических и ультраструктурных данных и привлечением имеющихся литературных источников, а также достоверное обоснование отрицательных результатов. К сожалению, автору не совсем удалось объединить две части работы. Не хватает обобщающей главы или небольшого заключения, возможно, с предложениями по дальнейшей работе. Однако непременно стоит отметить, что достоинств работы этот небольшой недостаток нисколько не умаляет. Рецензируемая диссертационная работа, представленная Анастасией Игоревной Евкайкиной, является серьезной исследовательской работой, демонстрирует великолепное владение анатомическими и молекулярно-генетическими методами биологии; ее оформление полностью соответствует всем требованиям, предъявляемым к квалификационной работе магистра, и заслуживает, без всяких сомнений, оценки «отлично».

Оценка: 5

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2011г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2012г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2013г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2014г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2015г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2016г.


контакты       карта сайта      почтовый сервер       управление      поддержка

199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., 7-9
© Санкт-Петербургский государственный университет, 2006-2017