АБИТУРИЕНТУ   СТУДЕНТУ   ВЫПУСКНИКУ   СОТРУДНИКУ   РАСПИСАНИЯ


БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

ГЛАВНАЯ
НАШ ФАКУЛЬТЕТ
ПОСТУПЛЕНИЕ
ПЕРЕВОД И ВОССТАНОВЛЕНИЕ
ОБРАЗОВАНИЕ
Учебно-методическая комиссия
Бакалавриат
Магистратура
Аннотации элективных дисциплин
Аспирантура
Докторантура
Выпускникам 2017
Конкурсы и стипендии
Соц. пакет студента
Вопросы по справкам и документам
НАУКА
ЭТИЧЕСКИЙ КОМИТЕТ
ШКОЛЬНИКАМ И УЧИТЕЛЯМ
СТУДСОВЕТ
БИБЛИОТЕКА
ЭКСПЕРТНАЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ
САЧОК
БЛОГ
ТРУДОУСТРОЙСТВО
АДМИНИСТРАЦИЯ
СВЕДЕНИЯ О СПбГУ
ЗЕЛЕНЫЙ КАМПУС

Авторизация
Запомнить меня на этом компьютере
  Забыли свой пароль?
 

Главная / Образование / Магистратура

Магистерские дипломы




Шехов Антон Валерьевич

Квалификационная работа магистра: "Оптимизация процесса выделения дефенсинов из лейкоцитов человека"

Аннотация: Дефенсины это катионные пептиды, компоненты врожденного иммунитета. Обладая широким спектром антимикробной и антивирусной активности, являясь онкомаркерами, дефенсины представляют собой крайне интересный объект для изучения. В настоящее время, когда многие микроорганизмы вырабатывают резистентность к антибиотикам, ведутся поиски биологически активных соединений, способных их заменить. Дефенсины могут стать такими препаратами. Так же дефенсины можно использовать в качестве маркеров различных заболеваний – показано, что уровень экспрессии дефенсинов зависит от течения некоторых заболеваний. Поэтому изучение свойств и биологических функций дефенсинов, методов их выделения и детектирования, а также областей их применения представляют несомненный научный интерес. Целью данной работы является подбор оптимальных условий для быстрого и несложного метода выделения дефенсинов из лейкоцитов человека в препаративных количествах для дальнейшей разработки тест-систем для обнаружения дефенсинов в биологических жидкостях человека (сыворотка, плазмы крови, слюна, слезы, моча, молоко и т.д.). Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи: 1. Подобрать оптимальные условия для быстрого и несложного метода выделения дефенсинов из лейкоцитов человека. 2. Выделить в препаративных количествах высокоочищенный биологически активный препарат дефенсинов из лейкоцитов человека. 3. Охарактеризовать выделенные препараты дефенсинов физико-химическими, микробиологическими и иммунохимическими методами. Для разработки метода были использованы приемы выделения и очистки α-дефенсинов (HNP 1-3) из лейкоцитов человека и α-дефенсинов макаки-резус (RMAD 1-7). В работе использовали биохимические методы исследования (экстракция, обращено-фазная высокоэффективная жидкостная хроматография, ионообменная хроматография, аналитический электрофорез в нативных и денатурирующих условиях), иммунохимические (вестерн-блоттинг) и микробиологические (метод радиальной диффузии). По результатам работы были сделаны следующие выводы: 1. Выделена пептидная фракция из лейкоцитов человека обогащенная дефенсинами методом двустадийной экстракции смесью метанол – уксусная кислота (9/1) и 80%-ным метанолом. 2. Получен высокоочищенный препарат дефенсинов методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии в градиенте ацетонитрила с 0,1%-ной ТФУ и рехроматографией методом ОФ ВЭЖХ в градиенте ацентонитрила с 0,1%-ной ГФМК. 3. Полученные пептиды являются α-дефенсинами человека HNP 1-3, с молекулярной массой около 4 кДа, со средней электрофоретической подвижностью в кислой среде в присутствии мочевины и обладают высокой антимикробной активностью против тестовых бактерий Listeria monocytogenes и Escherichia coli. 4. Подобраны оптимальные условия для быстрого выделения высокоочищенных препаратов дефенсинов из лейкоцитов человека, включающих в себя четыре стадии: метанол-уксусная экстракция, экстракция 80%-ным метанолом, обращенно-фазная высокоэффективная жидкостная хроматография в градиенте ацетонитрила с 0,1% ТФУ и рехроматографией дефенсиновой фракции в градиенте ацетонитрила с 0,1% ГФМК.

Направление: Биология

Кафедра: Биохимии

Научный руководитель: Леонова Лариса Евгеньевна , кандидат биологических наук

Дата защиты: 07-12-2011

Отзыв о магистранте: Шехов Антон Валерьевич поступил в магистратуру на кафедру биохимии Санкт-Петербургского государственного университета в 2009 году как специалист в области химии и включился в научно-исследовательскую работу по изучению антимикробных белков и пептидов. Антон Валерьевич проявил хорошие знания и навыки работы в области химии и компьютерных программ для сбора и обработки полученных результатов. Он успешно освоил целый ряд современных и трудоемких биохимических, иммунохимических и микробиологических методов, необходимых для проведения научных исследований. Антон Валерьевич в своей работе успешно использовал хроматографические методы, аналитические методы электрофоретического разделения белков, спектрофотометрические методы определения концентрации белка и пептидов, метод культивирования и оценки жизнеспособности бактериальных клеток, методы определения антимикробной активности белков и пептидов и приобрел необходимые навыки работы с современными лабораторными приборами. Антон Валерьевич с большим интересом отнесся к изучению литературы по данной теме и обсуждению результатов, проявил себя как творческий, заинтересованный, целеустремленный исследователь и организованный, трудолюбивый и аккуратный исполнитель. Антон Валерьевич всегда доброжелателен и отзывчив, в коллективе пользуется уважением.

Рецензент: Шамова О. В., кандидат биологических наук

Рецензия: Представленная работа посвящена разработке быстрого и относительно нетрудоемкого метода выделения антимикробных пептидов дефенсинов из лейкоцитов человека. Антимикробные пептиды являются ключевыми эффекторными молекулами системы врожденного иммунитета. Эти пептиды осуществляют противоинфекционную функцию, а также участвуют в реализации разнообразных защитных реакций организма. Альфа-дефенсины являются одними из основных представителей антимикробных пептидов врожденного иммунитета человека. В норме концентрация дефенсинов в крови не высока (10-40 нМ), но при различных видах патологии – инфекционном процессе, воспалении и других процессах, сопровождающихся дегрануляцией нейтрофилов, концентрация этих пептидов в крови и других биологических жидкостях повышается на несколько порядков. Поэтому определение уровня дефенсинов служит важным диагностическим признаком при ряде заболеваний. Таким образом, дефенсины являются важным объектом, как для научно-исследовательской работы, так и для клинической диагностики. Учитывая, что коммерческие препараты дефенсинов и антитела к ним дорогостоящи, разработка метода получения дефенсинов несомненно является актуальной задачей биомедицины. Цель работы Антона Валерьевича Шехова состояла в подборе оптимальных условий для быстрого и несложного метода выделения дефенсинов и лейкоцитов человека в препаративных количествах для дальнейшей разработки тест-систем для обнаружения дефенсинов в биологических жидкостях человека. В работе представлена методика, включающая метанол-уксусную экстракция и экстракцию 80% метанолом для получения пептидной фракции из лейкоцитов человека, обогащенной дефенснами и их последующая очистка с использованием обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, позволяющая получить высокоочищенные препараты дефенсинов. Электрофоретическая подвижность полученных пептидов в кислой среде по направлению к катоду и их антимикробная активность были изучены. Методом Вестерн-блоттинга с применением антител к альфа-дефенсинам человека подтверждено, что выделенные пептиды являются дефенсинами. Используемая методика обеспечила хороший выход пептидов, была относительно нетрудоемкой и не требовала больших затрат времени. Работа А.В.Шехова построена по стандартной схеме и включает главы Введение, Обзор литературы, Материалы и методы, Результаты и их обсуждение, Выводы и Список литературы. В главе Введение раскрыта цель работы и хорошо обоснована актуальность проводимых исследований. В Обзоре литературы освящается современное состояние науки в области изучения антимикробных пептидов животного происхождения, в частности дефенсинов, обсуждаются перспективы их применения в медицине; приводятся описанные в литературе методы выделения и очистки дефенинов. Разделы обзора логически взаимосвязаны. В главе Материалы и методы содержится детальное описание использованных методик. В работе применялись методы, адекватные поставленным задачам: высокоэффективная жидкостная хроматография, электрофоретические методы, Вестерн-блоттинг и другие. В разделе Результаты и их обсуждение приводятся полученные данные. Результаты хорошо иллюстрированы. Подписи к рисункам подробны и информативны. Обсуждаются преимущества разработанной методики по сравнению с применяемыми ранее методами В работе указаны и перспективы продолжения проводимых исследований. Выводы сформулированы четко и свидетельствуют о решении поставленных задач. Список литературы обширный; в основном, это зарубежные публикации; большое количество работ, опубликованных за последние 5 лет. К недостаткам работы можно отнести следующее: В главах Введение и Обзор литературы содержатся некоторые неудачные стилистические обороты. Например, во введении написано: «так как биологические функции дефенсинов уменьшаются со временем, то необходимо постоянно иметь свежий препарат» - учитывая, что биологические функции уменьшаться не могут, правильнее было бы писать о снижении активности препарата. Еще одна фраза во Введении кажется неудачной: «Новая методика должна отвечать следующим требованиям: экспрессивность и простота метода». Несмотря на то, что термин «экспресс-методы» существует, слово «экспрессивность» лучше заменить на более понятный термин, например, «методика, не требующая больших затрат времени». В Литобзоре при описании функций нейтрофильных гранулоцитов написано, что «в азурофильных гранулах синтезируются белки-предшественники», хотя, как известно, биосинтез белков происходит в других компартентах клетки. Еще одно неудачное предложение – об использовании дефенсинов «для увеличения резистентности рыб к неспецифическим защитным механизмам». В подписи к рисуну 5 следует писать вместо «ионно-обменной хроматографии на колонке Vydac C-18» - «обращенно-фазовой хроматографии на колонке Vydac C-18». В разделе Материалы и методы отсутствует указание на то, откуда были взяты антитела к дефенсинам человека, которые использовали для подтверждения принадлежности выделенных пептидов к дефесином. Необходимо указывать, использовались ли коммерческие препараты или антитела были кем-либо любезно предоставлены. В разделе Результаты и обсуждение в подписях к рисункам 30 и 31 и в тексте не расшифровывается обозначение “Lys” , указанное на электрофореграммах и, вероятно, подразумевающее «лизоцим». Приведенные в работе данные свидетельствуют о хорошем выходе дефенсинов, полученных в результате использованной методики; но эти данные выглядели бы еще более весомыми, если бы приводились аналогичные количественные характеристики выхода пептидов, полученных с помощью ранее описанных методов. Однако, перечисленные недостатки не портят общего хорошего впечатления от представленной работы, которая является полноценным биохимическим исследованием, имеющим и важное практическое значение, так как описанная методика поможет впоследствии разработать недорогую отечественную тест-систему для выявления и количественного определения альфа-дефенсинов. В целом, работа Шехова Антона Валерьевича «Оптимизация процесса выделения дефенинов из лейкоцитов человека» соответствует требованиям, предъявляемым к магистерским диссертациям и заслуживает оценки «отлично».

Оценка: 5

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2011г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2012г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2013г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2014г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2015г.

Аннотации квалификационных работ магистров выпуска 2016г.


контакты       карта сайта      почтовый сервер       управление      поддержка

199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., 7-9
© Санкт-Петербургский государственный университет, 2006-2017