АБИТУРИЕНТУ   СТУДЕНТУ   ВЫПУСКНИКУ   СОТРУДНИКУ   РАСПИСАНИЯ


БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

ГЛАВНАЯ
НАШ ФАКУЛЬТЕТ
ПОСТУПЛЕНИЕ
ПЕРЕВОД И ВОССТАНОВЛЕНИЕ
ОБРАЗОВАНИЕ
Учебно-методическая комиссия
Бакалавриат
Магистратура
Аннотации элективных дисциплин
Аспирантура
Докторантура
Выпускникам 2017
Конкурсы и стипендии
Соц. пакет студента
Вопросы по справкам и документам
НАУКА
ЭТИЧЕСКИЙ КОМИТЕТ
ШКОЛЬНИКАМ И УЧИТЕЛЯМ
СТУДСОВЕТ
БИБЛИОТЕКА
ЭКСПЕРТНАЯ ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ
САЧОК
БЛОГ
ТРУДОУСТРОЙСТВО
АДМИНИСТРАЦИЯ
СВЕДЕНИЯ О СПбГУ
ЗЕЛЕНЫЙ КАМПУС

Авторизация
Запомнить меня на этом компьютере
  Забыли свой пароль?
 

Главная / Образование / Магистратура

биофак СПбГУ


Добровольская Ольга Андреевна

Квалификационная работа магистра: "Создание иммуногена на основе белка TB10.4 Mycobacterium tuberculosis."

Аннотация:  Возбудителем туберкулеза служит бактерия Mycobacterium tuberculosis, реже - родственные ей виды Mycobacterium bovis и Mycobacterium africanum. На сегодняшний день туберкулез является одним из самых распространенных и опасных заболеваний в мире. По данным Всемирной организации здравоохранения, в 2013 году в мире туберкулезом заболело около 9 миллионов человек, и около 1,5 миллионов заболевших погибло.
На данный момент эффективная вакцинация признана наиболее перспективной стратегией борьбы с туберкулезом. Единственной зарегистрированной и разрешенной к применению противотуберкулезной вакциной является вакцина БЦЖ. Однако ее сомнительная эффективность и ряд побочных эффектов заставляют научное сообщество разрабатывать новые средства профилактики туберкулеза.
Можно выделить ряд направлений разработки новых противотуберкулезных вакцин, одним из которых является создание субъединичных вакцин на основе рекомбинантных белков. На данный момент идентифицирован ряд антигенов Mycobacterium tuberculosis, перспективных для использования в качестве компонентов новых вакцин. Так, культуральный фильтрат Mycobacterium tuberculosis содержит иммунодоминантные секретируемые антигены, одним из наиболее изученных из которых является белок TB10.4.
Белок TB10.4 специфичен для микобактерий, распознается на ранней стадии туберкулезной инфекции и способствует пролиферации лимфоцитов, ответственных за продукцию ИФН-γ. Белок TB10.4 также обладает адъювантным действием при введении в комплексе с белками микобактерий. Учитывая эти свойства, рекомбинантный белок TB10.4 может быть использован для создания новых кандидатных вакцин против туберкулеза.

Цель работы:
Создание иммуногена на основе белка TB10.4 Mycobacterium tuberculosis.
Задачи:
1.    Создание штамма E.coli – продуцента рекомбинантного белка TB10.4;
2.    Оптимизация условий экспрессии гена, кодирующего рекомбинантный белок TB10.4;
3.    Разработка метода очистки рекомбинантного белка TB10.4;
4.    Проведение предварительных исследований протективных свойств полученного иммуногена.

По результатам работы были сделаны следующие выводы:

1.    Создан штамм E.coli BL21(DE3)pET28(+)tb10.4 – продуцент рекомбинантного белка TB10.4. Разработан протокол индукции экспрессии кодирующего его гена, позволяющий достичь максимальной продуктивности (15 % от общего белка).
2.    Разработан метод получения очищенного нативного рекомбинантного белка TB10.4, заключающийся в применении иммобиллизованной металлоаффинной хроматографии в денатурирующих условиях с последующим переводом белка в нативные условия с помощью диализа, который позволяет получать белок с чистотой 98%.
3.    Исследования протективных свойств полученного препарата белка TB10.4, по показателям контроля тяжести течения инфекционного процесса у мышей, зараженных стандартным тест-штаммом Mycobacterium tuberculosis Erdman, выявили задержку развития экспериментального туберкулеза и достоверное снижение коэффициентов массы легких и селезенки на 45% и 22% соответственно по сравнению с контролем заражения. Также зафиксировано снижение индекса поражения легких на 14% и уменьшение выделения микобактерий из ткани легких на 12% по сравнению с контролем заражения.
4.    Исследования протективных свойств полученного препарата белка TB10.4, по показателям контроля тяжести течения инфекционного процесса у мышей, зараженных стандартным тест-штаммом Mycobacterium tuberculosis Erdman выявили большую эффективность исследуемого препарата по сравнению с коммерческой вакциной БЦЖ. Было зафиксировано достоверное снижение коэфициентов массы легких и селезенки на 19% и 10% соответственно, а также индекса поражения легких на 2,5% и уменьшение выделения микобактерий из ткани легких на 5,8%, по сравнению с показателями животных, иммунизированных коммерческой вакциной БЦЖ.
5.    Сравнение эффективности исследуемого препарата белка, вводимого одновременно с носителем CRM197, либо после семикратной иммунизации ИЛ-7, выявило наибольший протективный эффект при использовании исключительно препарата белка TB10.4. Данная кандидатная вакцина демонстрировала наибольшие показатели индекса защиты по сравнению с невакцинированными животными (+0,69) и по сравнению с животными, иммунизированными коммерческой вакциной БЦЖ (+0,31).
6.    Разработанные экспрессионная система на основе клеток E.coli для получения белка TB10.4 Mycobacterium tuberculosis и методика получения препарата на его основе позволяют получить максимальный выход белка 5,3 мг из 1 л питательной среды, что говорит об эффективности использования данного комплекса для создания иммуногена на основе белка TB10.4.


Направление: Биология

Кафедра: Биохимии

Научный руководитель: Духовлинов И.В., к.б.н., Тищенко Л.И., к.б.н.

Отзыв научного руководителя


Рецензент: А.Б.Комиссаров

Рецензия

Дата защиты: 15-06-2015


контакты       карта сайта      почтовый сервер       управление      поддержка

199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., 7-9
© Санкт-Петербургский государственный университет, 2006-2017